附件：基于核酸檢測(cè)方法的金黃色葡萄球菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年第80號(hào)）.doc

基于核酸檢測(cè)方法的金黃色葡萄球菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查
指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)基于核酸檢測(cè)方法進(jìn)行耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和金黃色葡萄球菌鑒別檢測(cè)的體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門(mén)審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是針對(duì)基于核酸檢測(cè)方法進(jìn)行耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和金黃色葡萄球菌鑒別檢測(cè)的體外診斷試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

（一）臨床背景

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）為革蘭陽(yáng)性球菌，是葡萄球菌屬的一種，分布廣泛，多種動(dòng)物和人均有易感性，是臨床上常見(jiàn)的致病菌。隨著抗菌藥物的使用，逐漸出現(xiàn)耐藥型金黃色葡萄球菌，如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA）。MRSA具有多重耐藥性，不僅對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥，也對(duì)氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類和喹諾酮類藥物都表現(xiàn)出不同程度的耐藥，其對(duì)不同抗菌藥物的耐藥率存在較大的地域差異，并有不同的變化趨勢(shì)。

MRSA分為醫(yī)療機(jī)構(gòu)相關(guān)性MRSA（healthcare-associated MRSA，HA-MRSA)、社區(qū)相關(guān)性MRSA ( community-associated MRSA，CA-MRSA )和家畜相關(guān)性（Livestock- associated MRSA，LA-MRSA）。CA-MRSA 和HA-MRSA 、LA-MRSA在微生物學(xué)、細(xì)菌耐藥（如HA-MRSA相較于CA-MRSA表現(xiàn)出更多多重耐藥）及臨床特點(diǎn)方面（如感染部位）有較大差異，根據(jù)這些特點(diǎn)可以將兩者進(jìn)行區(qū)分。但由于人員在醫(yī)院和社區(qū)間不斷流動(dòng)，CA-MRSA 和HA-MRSA 的差異日漸縮小。MRSA的分型有多種方式，如SCCmec、spa基因分型、多位點(diǎn)序列分型（MLST）、基于脈沖場(chǎng)凝膠電泳（PFGE）的分型等。

MRSA的耐藥機(jī)制可能是由于MRSA受到外界刺激后本身固有耐藥基因被激活或是引入了外來(lái)的耐藥基因并激活。目前臨床分離的MRSA菌株對(duì)大多數(shù)β-內(nèi)酰胺抗菌藥物耐藥（新型頭孢菌素類除外），大部分耐藥是由mecA、mecC基因介導(dǎo)，但是小部分MRSA不攜帶mecA基因，存在其它耐藥機(jī)制。

目前SA的臨床檢測(cè)方法包括：分離培養(yǎng)后，經(jīng)染色觀察、血漿凝固酶試驗(yàn)、生化鑒定，質(zhì)譜鑒定及聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)耐熱核酸酶（nuc）基因、SA保守基因16S rRNA和SA多種毒素基因。

MRSA的檢測(cè)方法包括頭孢西丁紙片擴(kuò)散法、苯唑西林微量肉湯/瓊脂稀釋法（MIC）、苯唑西林瓊脂篩選法、青霉素結(jié)合蛋白（PBP2a）乳膠凝集法、顯色培養(yǎng)基法、自動(dòng)化藥敏檢測(cè)以及聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)mecA等基因方法。

美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）推薦用于MRSA的檢測(cè)方法有：紙片擴(kuò)散法、2%NaCl肉湯/瓊脂稀釋法和苯唑西林瓊脂篩選法，這些檢測(cè)方法均需要在33-35℃條件下孵育24小時(shí)。

目前臨床推薦選擇頭孢西丁篩查試驗(yàn)進(jìn)行MRSA的檢測(cè)，還可以選擇苯唑西林微量肉湯/瓊脂稀釋法（MIC）。

MRSA/SA的臨床檢測(cè)樣本類型包括但不限于鼻拭子、痰液、皮膚及軟組織感染樣本、血培養(yǎng)陽(yáng)性并革蘭染色法陽(yáng)性球菌的樣品等人體樣本和培養(yǎng)物。不同樣本類型可能適用于不同的臨床預(yù)期用途：如用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)住院病人包括重癥監(jiān)護(hù)病人、手術(shù)病人及長(zhǎng)期護(hù)理病人等MRSA院內(nèi)感染的預(yù)防和控制的監(jiān)測(cè)，用于結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)如微生物培養(yǎng)等輔助診斷MRSA/SA的感染，用于臨床需進(jìn)行培養(yǎng)檢測(cè)的患者M(jìn)RSA/SA感染的輔助診斷等。

（二）本指導(dǎo)原則適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于基于核酸檢測(cè)方法進(jìn)行耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和金黃色葡萄球菌鑒別檢測(cè)的體外診斷試劑。常見(jiàn)方法包括熒光聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法、基因芯片法等。本指導(dǎo)原則的相關(guān)內(nèi)容基于熒光聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法對(duì)產(chǎn)品相關(guān)申報(bào)資料提出要求，其他方法的相關(guān)產(chǎn)品可依據(jù)方法學(xué)的具體特點(diǎn)參照?qǐng)?zhí)行。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及其他內(nèi)容，其中，與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥應(yīng)重點(diǎn)描述申報(bào)產(chǎn)品所檢測(cè)的金黃色葡萄球菌鑒定基因的選擇依據(jù)、耐藥突變位點(diǎn)與耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的相關(guān)性、基因選擇的依據(jù)及覆蓋的耐藥菌的情況、產(chǎn)品驗(yàn)證覆蓋的耐藥菌株及其在我國(guó)的流行特征；產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品所有可檢出的耐藥基因型（可包含不同分型方式下的分型，如SCCmec型、spa型以及PFGE分型）、尚未驗(yàn)證的耐藥菌株型別；同類產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從所檢菌株覆蓋情況、檢測(cè)的最低檢出限及不同菌株和型別間的交叉反應(yīng)等方面寫(xiě)明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料的撰寫(xiě)應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說(shuō)明》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料

此類產(chǎn)品主要為PCR方法，主要原材料包括引物、探針、DNA聚合酶、dNTP、尿嘧啶糖基化酶（如有）、核酸分離/純化組分（如有）、試劑盒質(zhì)控品及企業(yè)參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來(lái)源、制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料、質(zhì)控品的確認(rèn)試驗(yàn)資料；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)提供企業(yè)參考品的原材料選擇、來(lái)源、質(zhì)量指標(biāo)、參考品的制備及陰陽(yáng)性的確認(rèn)過(guò)程等。

1.引物和探針：包括申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)靶序列的引物和探針以及內(nèi)對(duì)照的引物和探針。應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對(duì)應(yīng)情況。針對(duì)檢測(cè)靶序列的引物和探針，建議設(shè)計(jì)兩套或多套引物、探針以供篩選，針對(duì)預(yù)期適用的型別進(jìn)行檢出準(zhǔn)確性和特異性（如交叉反應(yīng)）的評(píng)價(jià)，可采用擴(kuò)增靶序列與SA和MRSA基因組比對(duì)研究的方法，最終確認(rèn)最佳組合，并提交篩選的研究數(shù)據(jù)。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括序列準(zhǔn)確性、純度檢查、濃度檢查及功能性實(shí)驗(yàn)等。

2.酶：需要的酶主要包括DNA聚合酶，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下：

2.1DNA聚合酶應(yīng)包括DNA聚合酶活性、無(wú)核酸內(nèi)切酶活性、熱啟動(dòng)能力（如適用）、熱穩(wěn)定性等。

2.2如申報(bào)產(chǎn)品中包含尿嘧啶DNA糖基化酶，應(yīng)對(duì)其酶活性及熱穩(wěn)定性等質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行規(guī)定。

3.dNTP：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括純度檢查及功能性實(shí)驗(yàn)等。

4.核酸分離/純化組分（如有）的原理介紹、主要組成、主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)驗(yàn)證資料。

5.試劑盒質(zhì)控品

試劑盒的質(zhì)控體系通過(guò)設(shè)置各種試劑盒質(zhì)控品來(lái)實(shí)現(xiàn)，針對(duì)陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品，申請(qǐng)人應(yīng)明確質(zhì)控品的來(lái)源、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控品陰陽(yáng)性的確認(rèn)方法及相關(guān)驗(yàn)證資料。質(zhì)控品應(yīng)參與樣本處理和檢測(cè)的全過(guò)程，如核酸的平行提取等步驟。申報(bào)產(chǎn)品的質(zhì)控體系應(yīng)考慮以下幾個(gè)方面：

5.1陽(yáng)性質(zhì)控品中應(yīng)含有包含試劑盒所檢靶序列的DNA，優(yōu)先使用MRSA/SA分離滅活菌株，也可以采用工程菌株、克隆菌株等。企業(yè)應(yīng)對(duì)質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果做出明確的范圍要求（如Ct值）。

5.2陰性質(zhì)控品應(yīng)不含試劑盒所檢靶序列的基因，陰性質(zhì)控的基質(zhì)應(yīng)與實(shí)際樣本基質(zhì)一致或接近，以對(duì)可能存在的交叉污染產(chǎn)生的假陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

5.3對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）可以對(duì)管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）的引物、探針設(shè)計(jì)和模板濃度做精確驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽(yáng)性曲線又要盡量降低對(duì)靶基因檢測(cè)造成的抑制。對(duì)內(nèi)對(duì)照的檢測(cè)結(jié)果亦應(yīng)做出明確的范圍要求（如Ct值）。

6.企業(yè)參考品：應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明有關(guān)企業(yè)參考品的原料選擇、制備過(guò)程、提供陰陽(yáng)性確認(rèn)等試驗(yàn)資料。

企業(yè)參考品應(yīng)充分考慮產(chǎn)品檢測(cè)靶物質(zhì)的各種基因型別和耐藥菌株，考慮產(chǎn)品驗(yàn)證的性能需求進(jìn)行設(shè)置。具體要求如下：

6.1陽(yáng)性參考品

陽(yáng)性參考品應(yīng)采用經(jīng)鑒定確認(rèn)的多個(gè)臨床流行分離菌株、含有菌株純化的基因組DNA等，包含申報(bào)產(chǎn)品聲稱的應(yīng)檢出的MRSA/SA基因型。應(yīng)覆蓋我國(guó)主要的流行耐藥菌株，可包含不同分型方式下的分型，如SCCmec型、spa型以及PFGE分型等。

6.2陰性參考品（特異性參考品）

陰性參考品應(yīng)考慮檢測(cè)MRSA和SA的特異性分別進(jìn)行評(píng)價(jià)的要求，應(yīng)納入不在試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)的其他葡萄球菌、革蘭陽(yáng)性菌菌株和其他病原體樣品，特別是可能存在潛在競(jìng)爭(zhēng)抑制的甲氧西林敏感凝固酶陰性葡萄球菌。

6.3檢測(cè)限參考品

檢測(cè)限參考品應(yīng)分別針對(duì)MRSA和SA每個(gè)分析物靶基因和不同樣本類型設(shè)定檢測(cè)限附近連續(xù)稀釋的參考品，應(yīng)使用處于對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期的菌進(jìn)行制備，明確每個(gè)參考品的活菌數(shù)，以CFU/mL表示。應(yīng)明確CFU的確定方法。

6.4精密度參考品

精密度參考品應(yīng)使用菌株針對(duì)每個(gè)檢測(cè)目標(biāo)物設(shè)定一組參考品，包括陰性、弱陽(yáng)性（略高于臨界值，預(yù)期重復(fù)檢測(cè)95%陽(yáng)性）、中等陽(yáng)性（高于臨界值，預(yù)期檢測(cè)結(jié)果100%陽(yáng)性）三個(gè)水平。

如產(chǎn)品適用于不同的樣本類型，建議針對(duì)不同樣本類型設(shè)定不同的參考品基質(zhì)，應(yīng)與實(shí)際樣本類型基質(zhì)一致或相似，模擬基質(zhì)應(yīng)經(jīng)證實(shí)與天然基質(zhì)無(wú)顯著差異。

若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對(duì)穩(wěn)定，并提交主要原材料制備過(guò)程；如主要原材料購(gòu)自其他供應(yīng)商，則需針對(duì)供應(yīng)商的選擇提供評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)，并提供供應(yīng)商出具的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及申請(qǐng)人對(duì)該原材料進(jìn)行的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，可以圖表方式表示，并說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.反應(yīng)原理介紹。

3.詳述樣本采集、樣本處理方式的選擇和設(shè)置，提供相關(guān)的研究資料。

4.確定最佳反應(yīng)體系的研究資料，包括樣本用量、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽(yáng)離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等。

5.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。

6.如申報(bào)產(chǎn)品包含核酸分離/純化試劑，應(yīng)提交對(duì)核酸分離/純化過(guò)程進(jìn)行選擇的研究資料。

（四）分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)提交產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能評(píng)價(jià)的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、試驗(yàn)方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)和臨床樣本來(lái)源等。

針對(duì)不同的樣本類型如鼻拭子、痰液、皮膚和軟組織感染拭子樣本、血培養(yǎng)分離樣本等，申請(qǐng)人應(yīng)分別完成性能評(píng)估，包括陰陽(yáng)性符合率、最低檢測(cè)限、精密度評(píng)價(jià)、干擾驗(yàn)證等。

分析性能評(píng)價(jià)的試驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的國(guó)外或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。各項(xiàng)性能評(píng)價(jià)應(yīng)符合以下要求。

1.核酸分離/純化性能（如適用）

在進(jìn)行靶核酸檢測(cè)前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂岱蛛x/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的核酸外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。無(wú)論檢測(cè)試劑是否含有核酸分離/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)結(jié)合檢測(cè)試劑的特性，對(duì)配合使用的核酸分離/純化試劑針對(duì)聲稱樣本類型的提取效率、提取核酸純度等做充分的驗(yàn)證，提供詳細(xì)的驗(yàn)證資料。

2.最低檢測(cè)限

申報(bào)產(chǎn)品最低檢出限的性能評(píng)估資料應(yīng)包含最低檢出限的確定及驗(yàn)證過(guò)程。

應(yīng)使用臨床分離獲得的特征良好的MRSA/SA分離菌株進(jìn)行最低檢測(cè)限研究。所選菌株建議包含來(lái)自不同地區(qū)的MRSA/SA，以涵蓋金黃色葡萄球菌的遺傳多樣性，應(yīng)覆蓋不同分型方式下的不同分型，如SCCmec型、spa型、PFGE分型，涵蓋我國(guó)不同地區(qū)臨床常見(jiàn)型別。最低檢測(cè)限的確定研究試驗(yàn)應(yīng)使用上述選定的多種有代表性的MRSA/SA分離菌株進(jìn)行連續(xù)稀釋，以CFU/mL為檢測(cè)單位，如引入DNA拷貝數(shù)作為單位，應(yīng)確定兩者之間的換算關(guān)系。稀釋基質(zhì)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品聲稱的樣本類型分別配合相應(yīng)的基質(zhì)。如樣本類型為鼻拭子、痰液或皮膚及軟組織感染拭子，建議使用陰性鼻拭子或陰性皮膚及軟組織拭子洗液或模擬基質(zhì)進(jìn)行稀釋，如可使用含生理鹽水、粘蛋白及人類基因組DNA的基質(zhì)作為鼻拭子、痰液樣本替代基質(zhì)，使用含白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血漿的基質(zhì)作為皮膚及軟組織拭子樣本的替代基質(zhì)；如樣本類型為經(jīng)血培養(yǎng)并確定含革蘭陽(yáng)性球菌（GPC）的樣本，應(yīng)使用含人血液和適配的血液培養(yǎng)基作為模擬基質(zhì)，并應(yīng)添加高濃度的常見(jiàn)感染菌。可將模擬樣本稀釋液培養(yǎng)一段時(shí)間。無(wú)論使用何種模擬或替代基質(zhì)，應(yīng)進(jìn)行基質(zhì)比對(duì)性試驗(yàn)證明替代基質(zhì)與臨床實(shí)際樣本的等效性。

將各稀釋液重復(fù)檢測(cè)3-5次，預(yù)估檢測(cè)限范圍后制備至少20份檢測(cè)限濃度樣本，證實(shí)MRSA/SA檢出率達(dá)到95%的濃度作為最低檢測(cè)限。針對(duì)不同的血培養(yǎng)瓶或血培養(yǎng)系統(tǒng)，應(yīng)分別驗(yàn)證檢測(cè)限是否一致。

3.包容性

應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)產(chǎn)品能夠檢出的金黃色葡萄球菌中存在的基因多態(tài)性的MRSA/SA。在實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證菌株納入時(shí)考慮金黃色葡萄球菌的進(jìn)化結(jié)構(gòu)，常見(jiàn)克隆系和型別，并納入不同SCCmec型、spa型、PFGE類型的菌株。建議檢索近年國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道并收集各地區(qū)、不同菌株（社區(qū)和醫(yī)院內(nèi)感染，鼻腔、皮膚和軟組織感染等）進(jìn)行菌株驗(yàn)證。被驗(yàn)證細(xì)菌的濃度應(yīng)接近檢測(cè)限水平，所有菌株應(yīng)進(jìn)行鑒定和濃度測(cè)定。并應(yīng)在預(yù)期可能存在高濃度（高于106CFU/mL）的其他感染菌如甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）和耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌情況下進(jìn)行試驗(yàn)。

4．申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)申報(bào)產(chǎn)品精密度指標(biāo)做出合理要求。精密度評(píng)價(jià)使用菌株配制的企業(yè)參考品或相應(yīng)臨床樣本進(jìn)行，且精密度評(píng)價(jià)試驗(yàn)應(yīng)包含核酸分離/純化步驟。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求。

4.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測(cè)試劑（包括核酸分離/純化組分）本身的影響外，還應(yīng)對(duì)分析儀、操作者、地點(diǎn)、檢測(cè)批次等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。

4.2設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

4.3用于精密度評(píng)價(jià)的參考品或臨床樣本均應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性、弱陽(yáng)性（略高于臨界值，預(yù)期重復(fù)檢測(cè)95%陽(yáng)性）、中等陽(yáng)性（高于臨界值，預(yù)期檢測(cè)結(jié)果100%陽(yáng)性），并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?，臨床樣本精密度評(píng)價(jià)中的每一次檢測(cè)均應(yīng)從核酸提取開(kāi)始。

5.分析特異性

5.1交叉反應(yīng)

交叉反應(yīng)的驗(yàn)證應(yīng)結(jié)合樣本來(lái)源進(jìn)行，針對(duì)不同樣本類型考慮可能共生的潛在的交叉反應(yīng)病原體。應(yīng)使用高濃度交叉反應(yīng)病原體（如高于106CFU/mL的細(xì)菌和酵母，高于105PFU/mL的病毒）進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證，以明確是否存在交叉反應(yīng)所致的假陽(yáng)性。

針對(duì)鼻拭子、痰液樣本，應(yīng)考慮在鼻中及呼吸道的致病菌和共生菌，如甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）、凝固酶陰性葡萄球菌、耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE），以及革蘭陰性桿菌、革蘭陰性球菌、奈瑟菌、莫拉菌、酵母菌、革蘭陽(yáng)性桿菌、革蘭陽(yáng)性球菌等臨床常見(jiàn)菌種，凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌代表菌株。

針對(duì)皮膚和軟組織感染樣本或檢測(cè)來(lái)自血培養(yǎng)測(cè)定為陽(yáng)性微生物生長(zhǎng)并經(jīng)革蘭染色證實(shí)為革蘭陽(yáng)性球菌的樣本，應(yīng)納入更多微生物，包括皮膚菌群。對(duì)于血培瓶來(lái)源的樣本無(wú)必要進(jìn)行病毒交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

5.2微生物干擾

同樣采用上述潛在交叉反應(yīng)微生物，評(píng)價(jià)潛在微生物干擾，即是否對(duì)MRSA/SA臨界水平樣本檢測(cè)產(chǎn)生干擾。建議采用存在于各標(biāo)本類型的（鼻拭子、痰液、皮膚和軟組織感染、血培養(yǎng)樣本）和代表不同MRSA基因型的至少兩個(gè)MRSA菌株在臨界水平進(jìn)行微生物干擾試驗(yàn)。

5.3干擾物質(zhì)

評(píng)價(jià)各樣本類型中可能存在的干擾物質(zhì)是否對(duì)檢測(cè)造成干擾。建議采用存在于各標(biāo)本類型的（鼻拭子、痰液、皮膚和軟組織感染、血培養(yǎng)樣本）和代表不同MRSA基因型的至少兩個(gè)MRSA菌株的臨界濃度對(duì)干擾物質(zhì)（潛在最高濃度）進(jìn)行驗(yàn)證。鼻拭子樣本的干擾物質(zhì)應(yīng)考慮血液、鼻腔分泌物或黏液、鼻腔用藥。痰液樣本的干擾物應(yīng)考慮如血液、粘液、人細(xì)胞等。皮膚和軟組織感染樣本的潛在干擾物應(yīng)考慮血液、膿液、血漿、常用外用抗菌藥、抗生素等皮膚用藥。血培養(yǎng)樣本的潛在干擾物質(zhì)應(yīng)考慮血培養(yǎng)基、樹(shù)脂及活性炭等，具體結(jié)合培養(yǎng)瓶類型確定。

6.陽(yáng)性/陰性參考品符合率

陽(yáng)性參考品的檢測(cè)旨在驗(yàn)證試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)的MRSA/SA均可以在適當(dāng)?shù)臐舛缺粰z測(cè)到，陽(yáng)性參考品檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。陰性參考品旨在評(píng)價(jià)試劑特異性，陰性參考品檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性。

7.方法學(xué)比對(duì)研究

為驗(yàn)證擬申報(bào)產(chǎn)品靶核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性，應(yīng)選擇部分臨床樣本將擬申報(bào)產(chǎn)品與已上市核酸檢測(cè)試劑進(jìn)行比較研究。所選對(duì)比試劑檢測(cè)靶基因應(yīng)與擬申報(bào)試劑一致，方法性能可比，且臨床公認(rèn)質(zhì)量較好；對(duì)于無(wú)已上市核酸檢測(cè)試劑的目的基因，可與病毒核酸序列測(cè)定方法進(jìn)行比對(duì)。用于核酸序列測(cè)定的引物序列應(yīng)不同于考核試劑中用于檢測(cè)目的基因的引物序列。建議對(duì)擴(kuò)增子進(jìn)行雙向測(cè)序。方法學(xué)比對(duì)研究的具體方式可參考相關(guān)的國(guó)外或國(guó)內(nèi)有關(guān)的指導(dǎo)文件進(jìn)行，臨床樣本數(shù)量及其特性應(yīng)具有代表性，能夠充分驗(yàn)證擬申報(bào)產(chǎn)品靶核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

8.其他性能研究（如涉及）

如攜帶污染的驗(yàn)證，使用高陽(yáng)性樣本和陰性樣本交叉檢測(cè)多次運(yùn)行，考察設(shè)備多樣本檢驗(yàn)是否存在攜帶污染。

（五）陽(yáng)性判斷值確定資料

對(duì)于此類試劑，陽(yáng)性判斷值即為針對(duì)每個(gè)目標(biāo)物能夠獲得理想的臨床靈敏度和臨床特異性的臨界值（Cutoff），對(duì)于熒光探針PCR方法即為Ct值的確定資料。建議采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進(jìn)行相關(guān)研究。申請(qǐng)人應(yīng)選取適當(dāng)?shù)淖銐驍?shù)量的臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)以確定陽(yáng)性判斷值。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、開(kāi)瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，可以在合理的溫度范圍內(nèi)，每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

對(duì)于樣本提取后不能立即進(jìn)行檢測(cè)的，應(yīng)明確核酸儲(chǔ)存條件、儲(chǔ)存時(shí)間等內(nèi)容，同時(shí)應(yīng)提供相應(yīng)的核酸穩(wěn)定性研究資料。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說(shuō)明書(shū)【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

（七）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

申請(qǐng)人應(yīng)參考YY/T 0316《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》規(guī)定的過(guò)程和方法，在產(chǎn)品生命周期內(nèi)對(duì)申報(bào)產(chǎn)品可能造成的危害進(jìn)行判定（可重點(diǎn)參考YY/T 0316的附錄H），對(duì)每一危害處境的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行判定和評(píng)價(jià)，形成風(fēng)險(xiǎn)管理報(bào)告，控制這些風(fēng)險(xiǎn)并監(jiān)視控制的有效性，充分保證產(chǎn)品的安全性和有效性。

該試劑的主要危害大致可包括三個(gè)方面，即：生物學(xué)和化學(xué)危害、操作危害、信息危害。

1.生物學(xué)和化學(xué)危害

生物學(xué)：如細(xì)菌、病毒引起的交叉感染、檢測(cè)完成后剩余樣本、試劑和廢棄物處理不當(dāng)引起的交叉感染。

化學(xué)：如使用的清潔劑、消毒劑殘留引發(fā)的危害。

2.操作危害

不正確的測(cè)量：

如未按使用說(shuō)明書(shū)中的要求進(jìn)行測(cè)量，造成的測(cè)量失敗、測(cè)量誤差過(guò)大。

使用未經(jīng)驗(yàn)證的不同廠家的分析儀或使用未經(jīng)正確保養(yǎng)或校準(zhǔn)的儀器，造成的測(cè)量失敗、測(cè)量誤差過(guò)大。

在制造商規(guī)定的使用環(huán)境條件外使用產(chǎn)品，可能造成測(cè)量誤差過(guò)大。

3.信息危害

如說(shuō)明書(shū)或標(biāo)簽缺少或不正確，標(biāo)記的位置不正確，不能被正確的識(shí)別，不能清楚易認(rèn)。

不符合法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，包括產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中未對(duì)限制充分告知，未對(duì)不正確的操作、與其他設(shè)備共同使用時(shí)易產(chǎn)生的危害進(jìn)行警告，未正確標(biāo)示儲(chǔ)存條件、消毒方法、維護(hù)信息，未對(duì)因長(zhǎng)期使用產(chǎn)生功能喪失而可能引發(fā)的危害進(jìn)行警告，未對(duì)合理可預(yù)見(jiàn)的誤用進(jìn)行警告等引發(fā)的危害。

（八）臨床評(píng)價(jià)資料

臨床試驗(yàn)的開(kāi)展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫(xiě)等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求。

1.研究方法

建議采用前瞻性臨床試驗(yàn)對(duì)擬申報(bào)產(chǎn)品進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)，以SA和MRSA鑒定和藥敏檢測(cè)臨床參考方法作為對(duì)照方法，金黃色葡萄球菌鑒定應(yīng)結(jié)合形態(tài)學(xué)、凝固酶試驗(yàn)和生化鑒定、質(zhì)譜方法等方法，藥敏方法建議使用頭孢西丁紙片法或苯唑西林微量肉湯/瓊脂稀釋法（MIC），也可以應(yīng)用相應(yīng)的全自動(dòng)鑒定藥敏方法，證明擬上市產(chǎn)品的臨床性能和預(yù)期用途。針對(duì)不同樣本類型對(duì)應(yīng)的不同預(yù)期用途，分別設(shè)計(jì)臨床試驗(yàn)進(jìn)行研究。

2.臨床試驗(yàn)病例數(shù)

臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。本臨床試驗(yàn)的主要評(píng)價(jià)指標(biāo)為擬申報(bào)產(chǎn)品相對(duì)于臨床參考方法的靈敏度和特異性。

臨床總體樣本量應(yīng)分別考慮SA和MRSA陽(yáng)性和陰性樣本量的統(tǒng)計(jì)需求，綜合估算。SA和MRSA的臨床試驗(yàn)陽(yáng)性樣本例數(shù)的估算建議采用單組目標(biāo)值法，考核試劑的SA鑒定和MRSA藥敏檢測(cè)靈敏度目標(biāo)值建議針對(duì)不同樣本類型設(shè)置，建議鼻拭子、痰液、皮膚軟組織拭子等直接樣本的目標(biāo)值不低于90%，血培養(yǎng)樣本目標(biāo)值不低于95%。通過(guò)參數(shù)估計(jì)（含相應(yīng)可信區(qū)間估計(jì)）的方法證明產(chǎn)品針對(duì)SA鑒定和MRSA藥敏檢測(cè)的靈敏度不低于目標(biāo)值，可參考如下樣本量公式計(jì)算。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評(píng)價(jià)指標(biāo)的目標(biāo)值，PT為試驗(yàn)用體外診斷試劑評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

SA和MRSA的陰性樣本量的估算可不采用目標(biāo)值法，建議根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)獲得的特異度的預(yù)期值采用如下公式計(jì)算：

公式中n為樣本量，Z1-α/2為標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分位數(shù)，P為評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值，Δ為P的允許誤差大小，一般取P的95%可信區(qū)間寬度的一半，常用的取值為0.05-0.1。

同時(shí)總體樣本確定時(shí)應(yīng)考慮到培養(yǎng)鑒定的成功率、其他可能造成樣本脫落的情況以及可能需要納入的干擾等適當(dāng)增加樣本量。如不同樣本類型適用不同預(yù)期用途，針對(duì)每一種預(yù)期用途臨床試驗(yàn)總病例數(shù)均應(yīng)分別滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

3.臨床研究單位的選擇

應(yīng)選擇不少于3家（含3家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開(kāi)展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇應(yīng)盡量考慮擬申報(bào)產(chǎn)品的特點(diǎn)和預(yù)期用途，綜合流行病學(xué)背景，鑒于不同地區(qū)及醫(yī)療機(jī)構(gòu)中SA/MRSA流行情況的差異，應(yīng)選擇不同地區(qū)的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展臨床試驗(yàn)，不得選擇同一地區(qū)地域相近的醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行臨床試驗(yàn)。且臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉評(píng)價(jià)方案。

4.病例選擇及樣本類型

臨床試驗(yàn)病例選擇應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品聲稱預(yù)期用途中使用的樣本類型及適用人群進(jìn)行選擇，如臨床背景內(nèi)容中所述，該產(chǎn)品適用不同樣本類型時(shí)對(duì)應(yīng)不同的臨床預(yù)期用途，采用鼻拭子樣本的試劑用于MRSA院內(nèi)感染的預(yù)防和控制時(shí)，應(yīng)采用醫(yī)療機(jī)構(gòu)中的住院病人包括重癥監(jiān)護(hù)病人、手術(shù)病人及長(zhǎng)期護(hù)理病人等病例進(jìn)行臨床研究；皮膚及軟組織感染拭子用于結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)如微生物培養(yǎng)等輔助診斷MRSA/SA的皮膚和軟組織感染時(shí)，應(yīng)采用臨床皮膚和軟組織感染病例進(jìn)行臨床研究；血培養(yǎng)測(cè)定為陽(yáng)性微生物生長(zhǎng)并顯示包含由革蘭染色法產(chǎn)生的革陽(yáng)性球菌（GPC）的樣本用于臨床需進(jìn)行血培養(yǎng)檢測(cè)的患者M(jìn)RSA/SA感染的輔助診斷時(shí)，應(yīng)采用臨床需進(jìn)行血培養(yǎng)檢測(cè)的患者，且血培養(yǎng)測(cè)定為陽(yáng)性微生物生長(zhǎng)并顯示包含由革蘭染色法產(chǎn)生的革蘭陽(yáng)性球菌的患者作為病例進(jìn)行臨床研究。同時(shí)適用于上述不同樣本類型時(shí)，應(yīng)分別進(jìn)行相關(guān)病例的臨床研究。

申請(qǐng)人在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)綜合考慮到試劑所適用的各類人群的潛在差異，如年齡、性別、病情等。

同時(shí)應(yīng)關(guān)注樣本中其他病原體的存在情況、內(nèi)源和外源干擾因素。

5.倫理學(xué)要求

臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)的同意。研究者應(yīng)考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)性，應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見(jiàn)。

6.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過(guò)程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑應(yīng)一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如檢測(cè)結(jié)果一致性分析、臨床靈敏度、特異度等。常選擇2×2表的形式總結(jié)兩種方法的定性檢測(cè)結(jié)果。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與參比方法是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。靈敏度結(jié)果的95%置信區(qū)間下限應(yīng)高于目標(biāo)值。特異性結(jié)果與預(yù)期值差異應(yīng)有明確可接受標(biāo)準(zhǔn)，如差異較大，應(yīng)有合理的解釋或繼續(xù)擴(kuò)大樣本量。應(yīng)分別對(duì)SA和MRSA的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較統(tǒng)計(jì)和分析。

對(duì)于不一致樣本，應(yīng)在方案中明確是否需進(jìn)一步復(fù)測(cè)或確認(rèn)，并對(duì)不一致原因進(jìn)行分析。

8.質(zhì)量控制

臨床試驗(yàn)開(kāi)始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可精密度精密度。

9.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫(xiě)

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

9.1臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

9.1.1臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹。

9.1.2病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)、盲態(tài)檢測(cè)要求等。

9.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

9.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

9.2 具體的臨床試驗(yàn)情況

9.2.1臨床試驗(yàn)所用體外診斷試劑及儀器的名稱、批號(hào)、機(jī)型等信息。

9.2.2對(duì)各研究單位的病例數(shù)、年齡分布情況分布情況進(jìn)行綜合，建議以列表或圖示方式列出各年齡組的樣本例數(shù)。

9.2.3質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況。

9.2.4具體試驗(yàn)過(guò)程，樣本收集、樣本保存、樣本檢測(cè)、結(jié)果處理、結(jié)果不一致樣本的確認(rèn)等。

9.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

9.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過(guò)程中是否涉及對(duì)方案的修改；

9.3.2結(jié)果的一致性分析

計(jì)算陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率，采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法，如四格表卡方檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。

9.4討論和結(jié)論

對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無(wú)特別說(shuō)明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

9.5其他

臨床試驗(yàn)中如涉及核酸序列測(cè)定方法，應(yīng)在臨床研究報(bào)告中對(duì)選用的測(cè)序方法做詳細(xì)介紹，并提供以下關(guān)于測(cè)序試驗(yàn)的詳細(xì)信息及資料。

9.5.1測(cè)序方法原理、測(cè)序儀型號(hào)、測(cè)序試劑及消耗品的相關(guān)信息。

9.5.2測(cè)序方法所用引物相關(guān)信息，如基因區(qū)段選擇，分子量、純度、功能性試驗(yàn)等資料。

9.5.3對(duì)所選測(cè)序方法的分析性能進(jìn)行合理驗(yàn)證，尤其是最低檢測(cè)限的確認(rèn)，建議將所選測(cè)序方法與擬申報(bào)產(chǎn)品的相關(guān)性能進(jìn)行適當(dāng)比對(duì)分析。

9.5.4測(cè)序方法應(yīng)建立合理的陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品對(duì)臨床樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

9.5.5提交有代表性的樣本測(cè)序圖譜及結(jié)果分析資料。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制、前期臨床評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的有關(guān)要求，編寫(xiě)產(chǎn)品技術(shù)要求。

該試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陰/陽(yáng)性參考品符合率、精密度、最低檢測(cè)限等。性能指標(biāo)應(yīng)依據(jù)分析性能評(píng)估試驗(yàn)結(jié)果確定，檢驗(yàn)方法應(yīng)明確具體操作方法和使用的樣本及參考品情況。

該產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請(qǐng)人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫(xiě)規(guī)范的要求。

（十）產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

應(yīng)提供該產(chǎn)品符合產(chǎn)品技術(shù)要求的，在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行的產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告；應(yīng)提供連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)合格報(bào)告。

（十一）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

說(shuō)明書(shū)承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說(shuō)明書(shū)除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書(shū)的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求，下面對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和金黃色葡萄球菌鑒別和檢測(cè)的體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說(shuō)明書(shū)編制。

1.【預(yù)期用途】

1.1試劑盒用于定性檢測(cè)人鼻拭子、痰液、皮膚及軟組織感染拭子、血培養(yǎng)測(cè)定為陽(yáng)性微生物生長(zhǎng)并顯示包含由革蘭染色法產(chǎn)生的革蘭陽(yáng)性球菌的樣品等樣本的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和金黃色葡萄球菌，適用樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究完成情況進(jìn)行確認(rèn)。

1.2明確試劑不同樣本類型的臨床意義，如鼻拭子樣本用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)住院病人包括重癥監(jiān)護(hù)病人、手術(shù)病人及長(zhǎng)期護(hù)理病人等MRSA院內(nèi)感染的預(yù)防和控制；皮膚及軟組織感染拭子用于結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)如微生物培養(yǎng)等輔助診斷MRSA/SA的皮膚和軟組織感染；血培養(yǎng)測(cè)定為陽(yáng)性微生物生長(zhǎng)并顯示包含由革蘭染色法產(chǎn)生的革蘭陽(yáng)性球菌的樣本用于臨床需進(jìn)行血培養(yǎng)檢測(cè)的患者M(jìn)RSA/SA感染的輔助診斷等。

1.3SA和MRSA流行特征介紹。

1.4簡(jiǎn)單介紹待測(cè)目標(biāo)的特征，如待測(cè)靶基因特征及與SA和MRSA的關(guān)系等。

2.【檢驗(yàn)原理】

詳細(xì)說(shuō)明試劑盒技術(shù)原理，即核酸分離/純化方法、原理。說(shuō)明檢測(cè)的靶基因座位、序列長(zhǎng)度等；介紹引物及探針設(shè)計(jì)、不同樣品反應(yīng)體系（管）組合、對(duì)照品（質(zhì)控品）設(shè)置及熒光信號(hào)標(biāo)記等。如添加了相關(guān)的防污染組分（如尿嘧啶DNA糖基化酶，即UDG/UNG等），也應(yīng)對(duì)其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹。

3.【主要組成成分】

詳細(xì)說(shuō)明試劑盒內(nèi)各組分的名稱、數(shù)量、成分、濃度等信息，如含有生物源性物質(zhì)，應(yīng)說(shuō)明其生物學(xué)來(lái)源、活性及其他特性；說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，應(yīng)列出相關(guān)試劑的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、貨號(hào)以及醫(yī)療器械注冊(cè)證號(hào)/備案號(hào)（如有）等詳細(xì)信息。當(dāng)試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分時(shí)，應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的如上信息。

4.【儲(chǔ)存條件及有效期】

試劑盒的效期穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)與相應(yīng)的穩(wěn)定性研究結(jié)論一致。

5.【適用儀器】

所有適用的儀器型號(hào)，提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

6.【樣本要求】 

明確適用的樣本類型。并詳細(xì)描述樣本采集及預(yù)處理要求、運(yùn)輸要求、保存條件及期限等。特別是樣本采集所需設(shè)備及保存液，需特別明確供應(yīng)商、貨號(hào)及注冊(cè)證號(hào)（如有）。有關(guān)描述均應(yīng)建立在相關(guān)性能評(píng)價(jià)及穩(wěn)定性研究的基礎(chǔ)上。

樣本的取材及處理方式等若有通用的技術(shù)規(guī)范或指南，則應(yīng)遵循，并在此處引用。

7.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

7.1試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

7.2核酸分離/純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)。對(duì)照品（質(zhì)控品）參與樣本核酸的平行提取的要求等。

7.3擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：各組分加樣體積、順序、相關(guān)注意事項(xiàng)等。

7.4 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。

7.5儀器設(shè)置：特殊參數(shù)，待測(cè)基因、內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇等。

7.6質(zhì)量控制：說(shuō)明對(duì)照品（質(zhì)控品）的檢測(cè)要求。

8.【陽(yáng)性判斷值】

簡(jiǎn)要總結(jié)陽(yáng)性判斷值研究方法及結(jié)論。明確說(shuō)明樣本的陽(yáng)性判斷值。

9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

說(shuō)明對(duì)照品、內(nèi)標(biāo)的正確結(jié)果要求，結(jié)合對(duì)照品（質(zhì)控品）以及樣本管中靶基因和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋?xiě)?yīng)以陽(yáng)性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。

10.【檢驗(yàn)方法的局限性】

應(yīng)至少包括如下描述：

10.1本試劑檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析，不得單獨(dú)作為患者管理的依據(jù)。

10.2基因檢測(cè)結(jié)果僅能覆蓋耐藥機(jī)制為相應(yīng)基因（如mecA基因和或mecC）的耐藥結(jié)果，但是小部分MRSA不攜帶mecA和/或mecC基因，存在其它耐藥機(jī)制，可能出現(xiàn)漏檢。

10.3不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理以及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述分析性能評(píng)估的試驗(yàn)結(jié)果并簡(jiǎn)要描述臨床試驗(yàn)的基本信息、試驗(yàn)方法和結(jié)論。

12.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

12.1如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應(yīng)給出生物安全性的警告。

12.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)或現(xiàn)行有效版本）等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

12.3強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品性能僅針對(duì)聲稱的適用樣本類型及【樣本要求】項(xiàng)下說(shuō)明的樣本采集和處理方法（包括樣本采集液等）進(jìn)行了驗(yàn)證，其他樣本類型或樣本采集、處理方法不能保證產(chǎn)品性能。

12.4強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)接受過(guò)基因擴(kuò)增或分子生物學(xué)方法檢測(cè)的專業(yè)培訓(xùn)，具備相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作資格，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備合理的生物安全防備設(shè)施及防護(hù)程序。

四、編寫(xiě)單位

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。